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Microscopía de fluorescencia de alta resolución

17.10.2014

Para ver la celda y su contenido, debemos tomar un microscopio. Su principio de funcionamiento es relativamente sencillo: los rayos de luz atraviesan un objeto y luego entran en lentes de aumento, de modo que podemos ver tanto la célula como algunos de los orgánulos que hay en su interior, como el núcleo o las mitocondrias.

Pero si queremos ver una proteína o una molécula de ADN, o mirar un gran complejo supramolecular como un ribosoma o una partícula de virus, entonces un microscopio óptico ordinario será inútil. Allá por 1873, el físico alemán Ernst Abbe dedujo una fórmula que pone un límite a las capacidades de cualquier microscopio óptico: resulta que es imposible ver un objeto más pequeño que la mitad de la longitud de onda de la luz visible, es decir, menos de 0,2 micrómetros.

La solución, obviamente, es elegir algo que pueda reemplazar la luz visible. Puede usar un haz de electrones y luego obtenemos un microscopio electrónico: puede observar virus y moléculas de proteínas en él, pero los objetos observados durante la microscopía electrónica caen en condiciones completamente antinaturales. Por lo tanto, la idea de Stefan W. Hell del Instituto de Química Biofísica de la Sociedad Max Planck (Alemania) resultó ser un gran éxito.

La esencia de la idea era que un objeto podría irradiarse con un rayo láser, lo que pondría a las moléculas biológicas en un estado excitado. A partir de este estado, comenzarán a pasar al estado normal, liberándose del exceso de energía en forma de radiación de luz, es decir, comenzará la fluorescencia y las moléculas se harán visibles. Pero las ondas emitidas serán de longitudes muy diferentes, y tendremos ante nuestros ojos un punto indefinido. Para evitar que esto suceda, junto con el láser de excitación, el objeto se trata con un haz de extinción, que suprime todas las ondas excepto las que tienen una longitud nanométrica. La radiación con una longitud de onda del orden de los nanómetros sólo permite distinguir una molécula de otra.

El método se denominó STED (disminución de emisiones estimuladas), y fue por esto que Stefan Hell recibió su parte del Premio Nobel. Con la microscopía STED, el objeto no está completamente cubierto por la excitación del láser a la vez, sino que, por así decirlo, es atraído por dos delgados haces de rayos (excitador y extintor), porque cuanto menor es el área que emite fluorescencia en un momento dado, mayor es la intensidad de la luz. la resolución de la imagen.

Posteriormente, el método STED se complementó con la llamada microscopía de molécula única, desarrollada de forma independiente a fines del siglo XX por otros dos laureados actuales, Eric Betzig del Instituto Howard Hughes y William E. Moerner de Stanford. En la mayoría de los métodos fisicoquímicos que se basan en la fluorescencia, observamos la radiación total de muchas moléculas a la vez. William Merner acaba de proponer un método mediante el cual se puede observar la radiación de una sola molécula. Mientras experimentaba con la proteína fluorescente verde (GFP), notó que el brillo de sus moléculas se puede encender y apagar arbitrariamente manipulando la longitud de onda de excitación. Al encender y apagar la fluorescencia de diferentes moléculas de GFP, se pudieron observar en un microscopio óptico, ignorando la limitación nanométrica de Abbe. La imagen completa podría obtenerse simplemente combinando varias imágenes con diferentes moléculas luminosas en el campo de visión. Estos datos se complementaron con las ideas de Eric Betzig, quien propuso aumentar la resolución de la microscopía de fluorescencia mediante el uso de proteínas con diferentes propiedades ópticas (es decir, en términos generales, multicolores).

La combinación del método de extinción de excitación de Hell con el método de imposición de suma de Betzig-Merner ha hecho posible desarrollar microscopía de resolución nanométrica. Con su ayuda, podemos observar no solo los orgánulos y sus fragmentos, sino también las interacciones de las moléculas entre sí (si las moléculas están marcadas con proteínas fluorescentes), lo que, repetimos, no siempre es posible con los métodos de microscopía electrónica. El valor del método difícilmente puede sobreestimarse, porque los contactos intermoleculares son sobre los que se apoya la biología molecular y sin los cuales es imposible, por ejemplo, ni la creación de nuevos fármacos, ni la decodificación de mecanismos genéticos, ni muchas otras cosas que yacen en el campo de la ciencia y la tecnología modernas.

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Contenido de alcohol de la cerveza caliente. 07.05.2024

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Carne de res sobre granos de arroz 17.02.2024

Los bioingenieros han utilizado granos de arroz como base para el cultivo de carne de res para enriquecer el producto vegetal con los elementos nutricionales de la carne. Actualmente, el arroz contiene un poco más de grasas y proteínas, pero en el futuro está previsto aumentar el número de células, lo que aumentará estos indicadores. El coste de este arroz se estima en unos 2,23 dólares el kilogramo, en comparación con el arroz normal que cuesta 2,2 dólares, pero significativamente más barato que la carne de res, que cuesta 14,88 dólares.

Los experimentos con el cultivo de carne de vacuno con granos de arroz representan un enfoque innovador para crear alimentos más nutritivos. A pesar de las limitaciones actuales, la investigación podría conducir al desarrollo de nuevos métodos para producir alimentos enriquecidos con carne, lo que tendría un impacto positivo en la nutrición humana.

El arroz es uno de los alimentos más populares del mundo debido a su baja alergenicidad y relativa disponibilidad. Sin embargo, no contiene todos los nutrientes necesarios para el ser humano, por lo que los científicos se esfuerzan por hacerlo más completo. Los expertos utilizan la modificación genética de plantas para aumentar los niveles de betacaroteno, un precursor de la vitamina A.

Los científicos de la Universidad de Yonsei en Corea del Sur decidieron complementar el arroz con carne, evitando el uso de animales, para reducir costos y el impacto ambiental. Intentaron cultivar carne a partir de cereales.

Inicialmente, los científicos asumieron que el músculo de la vaca y las células grasas se adherirían fácilmente a los granos de arroz porosos. Sin embargo, los primeros experimentos no tuvieron éxito. Para aumentar la unión y el crecimiento de las células, los científicos pretrataron los granos de arroz crudo con gelatina de pescado y agregaron transglutaminasa microbiana, un aditivo alimentario común. Después de que las células crecieron en el arroz durante una semana, se lavó y se coció al vapor como arroz normal.

Los productos resultantes, granos de arroz rosado, resultaron ser más duraderos que los normales. Su valor nutricional también ha cambiado, aunque sólo ligeramente. Por ejemplo, 100 g de arroz con carne contienen 0,1 g más de grasa y 0,31 g más de proteína que el arroz normal, lo que representa una diferencia del 7 y el 9 por ciento, respectivamente. Esto es similar a comer 100 gramos de arroz y un gramo de carne de res. Sin embargo, los científicos se dan cuenta de que la razón es que no hay suficientes células, por lo que solo formaron una fina capa sobre los granos de arroz. En experimentos posteriores, los autores trabajarán para aumentar la cantidad de células de vaca en el arroz.

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